O tendão calcâneo é o maior e mais forte tendão do organismo, sujeito a tendinopatias. O foco de estudos desse tipo de tecido fica restrito às lesões e aos possíveis tratamentos e, portanto, é fundamental que a coleta dos tendões e o preparo das lâminas sejam cautelosas a fim de não perder as amostras. Na literatura não há estudos que apresentem detalhadamente esses protocolos. Sendo assim, o objetivo desse trabalho foi o estabelecimento do melhor protocolo de coleta e preparo de lâminas do tendão calcâneo de ratos Wistar. Para tal, 80 ratos Wistar foram submetidos à eutanásia e imediata coleta do tendão. Os animais foram divididos em 16 grupos variando quanto à associação do tendão com pele, grupo muscular e articulação tíbio-társica, além do posicionamento do tecido no bloco de parafina (topo ou fundo do bloco). As amostras foram fixadas em formol a 10%, processadas por técnica histológica convencional e coradas por hematoxilina e eosina. A avaliação histológica foi realizada por meio de escores ordinais referentes à presença de fibroblastos, arranjo das fibras colágenas, disposição do estroma e organização celular. Os dados foram submetidos ao teste de Kruskal–Wallis, seguido do pós-teste de Dunn (p<0,05). Os resultados indicaram variação descritiva na qualidade histológica entre os diferentes protocolos avaliados, especialmente relacionada à organização celular e ao arranjo do colágeno. O posicionamento do tendão com pele no fundo do bloco apresentou melhor preservação estrutural de forma descritiva. Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre as espessuras de corte de 2 µm e 5 µm. Conclui-se que a padronização do posicionamento do tecido no bloco e da orientação de corte é o principal fator determinante para a qualidade e reprodutibilidade da avaliação histopatológica do tendão calcâneo.
The calcaneal tendon is the largest and strongest tendon in the body and is commonly affected by tendinopathies. Studies involving this tissue are mainly focused on injuries and therapeutic approaches; therefore, careful tendon harvesting and histological processing are essential to avoid sample loss. However, the literature lacks detailed protocols describing these procedures. Thus, the aim of this study was to establish the most appropriate protocol for collection and histological slide preparation of the calcaneal tendon in Wistar rats. Eighty Wistar rats were euthanized, followed by immediate tendon collection. The animals were allocated into 16 groups, varying according to the association of the tendon with skin, muscle group, and the tibiotarsal joint, as well as tissue positioning within the paraffin block (top or bottom). Samples were fixed in 10% formalin, processed using conventional histological techniques, and stained with hematoxylin and eosin. Histological evaluation was performed using ordinal scoring systems for fibroblast presence, collagen fiber arrangement, stromal disposition, and cellular organization. Data were analyzed using the Kruskal–Wallis test followed by Dunn’s post hoc test (p<0.05). The results demonstrated descriptive variation in histological quality among the evaluated protocols, particularly regarding cellular organization and collagen arrangement. Positioning the tendon with skin at the bottom of the paraffin block resulted in better structural preservation in a descriptive manner. No statistically significant differences were observed between the 2 µm and 5 µm section thicknesses. It is concluded that standardization of tissue positioning within the block and cutting orientation is the main determinant of quality and reproducibility in histopathological evaluation of the calcaneal tendon.
El tendón calcáneo es el tendón más grande y resistente del organismo y está frecuentemente afectado por tendinopatías. Los estudios sobre este tejido se centran principalmente en las lesiones y sus tratamientos, por lo que la correcta recolección y el adecuado procesamiento histológico son fundamentales para evitar la pérdida de muestras. Sin embargo, la literatura carece de protocolos detallados que describan estos procedimientos. Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue establecer el mejor protocolo de recolección y preparación de cortes histológicos del tendón calcáneo de ratas Wistar. Para ello, 80 ratas Wistar fueron sometidas a eutanasia y a la recolección inmediata del tendón. Los animales se distribuyeron en 16 grupos, variando según la asociación del tendón con piel, grupo muscular y articulación tibio-tarsiana, así como el posicionamiento del tejido en el bloque de parafina (parte superior o inferior). Las muestras se fijaron en formol al 10%, se procesaron mediante técnica histológica convencional y se tiñeron con hematoxilina y eosina. La evaluación histológica se realizó mediante puntuaciones ordinales referentes a la presencia de fibroblastos, el arreglo de las fibras colágenas, la disposición del estroma y la organización celular. Los datos se analizaron mediante la prueba de Kruskal–Wallis, seguida del post hoc de Dunn (p<0,05). Los resultados mostraron una variación descriptiva en la calidad histológica entre los protocolos evaluados, especialmente en relación con la organización celular y el arreglo del colágeno. El posicionamiento del tendón con piel en el fondo del bloque presentó una mejor preservación estructural de forma descriptiva. No se observaron diferencias estadísticamente significativas entre los espesores de corte de 2 µm y 5 µm. Se concluye que la estandarización del posicionamiento del tejido en el bloque y de la orientación del corte es el principal factor determinante para la calidad y la reproducibilidad de la evaluación histopatológica del tendón calcáneo.
